Uji Aktivitas Lipolitik

Aktivitas enzim lipase menyatakan jumlah enzim yang mampu menghidrolisis sejumlah lemak dan minyak dalam satu satuan waktu. Satu unit lipase per ml (U/ml) menyatakan banyaknya enzim lipase yang dapat melepaskan 1 μmol asam lemak bebas per menit. Analisis aktivitas enzim lipase dilakukan terhadap enzim lipase yang merupakan hasil dari sentrifuge dengan menggunakan metode Lindfield dkk. (1984). Sebanyak 2 gram minyak sawit ditimbang dalam labu erlenmeyer 150 ml. Setelah itu ditambahkan 1 ml larutan enzim encer yang telah disaring dan 4 ml larutan buffer fosfat dengan pH 7. Campuran diaduk dengan menggunakan magnetic stirrer selama 60 menit. Inaktivasi substrat enzim dilakukan dengan menambahkan 10 ml aseton – etanol  (1:1) dan aduk hingga homogen. Penambahan 2-3 tetes phenolphthalein 1% sebagai indikator reaksi. Titrasi dengan menggunakan KOH 0,1 N sampai warna larutan menjadi merah muda dan tidak hilang. Titrasi dilakukan sebanyak 2 kali.

Larutan blanko dibuat dengan cara yang sama dengan sampel, tetapi larutan aseton - etanol (1:1) ditambahkan pada menit ke – 0 sebelum diaduk, untuk mematikan enzim. Aktivitas enzim lipase dapat dihitung dengan rumus berikut :

Aktivitas lipase (U/ml) = ( A – B )  x N KOH x 1000 :60

                      

A = ml volume KOH untuk sampel, B = ml volume KOH untuk blangko, 1000 = konversi dari mmol ke μmol, dan 60 = waktu reaksi (Murni dkk. 2011).